កត្តាកំណត់ប្រសិទ្ធភាពនៃការសំយោគ DNA

នៅក្នុងការសំយោគ DNA ធម្មតា RNA និងការសំយោគអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកដែលមិនមែនជាធម្មជាតិ ជំហានការពារ និងការភ្ជាប់គ្នាដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់។

ជំហានការពារគឺដើម្បីដកក្រុម DMT នៅលើការគាំទ្ររឹង ឬក្រុម 5' hydroxyl នៅលើ nucleoside មុនជាមួយនឹងអាស៊ីតសរីរាង្គ ហើយលាតត្រដាងក្រុម hydroxyl សម្រាប់ជំហានភ្ជាប់ខាងក្រោម។អាស៊ីត trichloroacetic 3% នៅក្នុង dichloromethane ឬ toluene ភាគច្រើនត្រូវបានប្រើដើម្បីអនុវត្តជំហានការពារ។ការប្រមូលផ្តុំអាស៊ីត trichloroacetic និងពេលវេលាការពារ (ពេលវេលាទប់ស្កាត់) គ្របដណ្តប់ភាពបរិសុទ្ធនៃផលិតផលចុងក្រោយ។ការផ្តោតអារម្មណ៍ទាប និងពេលវេលាទប់ស្កាត់មិនគ្រប់គ្រាន់ទុកក្រុម DMT ដែលមិនមានប្រតិកម្ម ដែលកាត់បន្ថយទិន្នផល និងបង្កើនភាពមិនបរិសុទ្ធដែលមិនចង់បាន។ពេលវេលារារាំងដ៏យូរអាចនាំឱ្យ depurine នៃលំដាប់សំយោគ បង្កើតជាភាពមិនបរិសុទ្ធដែលមិនបានរំពឹងទុក។

ជំហាននៃការភ្ជាប់គឺប្រកាន់អក្សរតូចធំទៅនឹងមាតិកាទឹកនៃសារធាតុរំលាយ និងសំណើមនៅក្នុងខ្យល់។កំហាប់ទឹកក្នុងការសំយោគគួរតែមានតិចជាង 40 ppm ល្អតិចជាង 25 ppm ។ដើម្បីរក្សាលក្ខខណ្ឌនៃការសំយោគគ្មានជាតិទឹក ការសំយោគអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកគួរតែត្រូវបានអនុវត្តក្នុងបរិយាកាសសំណើមទាប ដូច្នេះយើងណែនាំអតិថិជនរបស់យើងឱ្យប្រើគ្រឿងបរិក្ខាររំលាយអាមីឌីតដែលអាចរំលាយ Phosphoramidite ម្សៅ ឬខ្លាញ់នៅក្នុង acetonitrile ដែលគ្មានជាតិទឹក ដើម្បីជៀសវាងការប៉ះពាល់ជាមួយខ្យល់។

កត្តាកំណត់ប្រសិទ្ធភាពនៃការសំយោគ DNA ៥
កត្តាកំណត់ប្រសិទ្ធភាពនៃការសំយោគ DNA ៤

ចាប់តាំងពីការរលាយនៃ phosphoramidites វាប្រសើរជាងនៅក្នុងស្ថានភាពមិនទឹក ហើយអន្ទាក់ម៉ូលេគុលដើម្បីស្រូបយកទឹកដាននៅក្នុង reagents និង amidite វាចាំបាច់ត្រូវរៀបចំអន្ទាក់ម៉ូលេគុល.យើងសូមផ្តល់អនុសាសន៍ 2 ក្រាមសម្រាប់ដប reagent 50-250ml, 5g សម្រាប់ដប reagent 250-500ml, 10g សម្រាប់ដប reagent 500-1000ml និង 20g សម្រាប់ដប reagent 1000-2000ml ។

ការរំលាយ phosphoramidites គួរតែត្រូវបានអនុវត្តក្រោមបរិយាកាសអសកម្ម ហើយការជំនួសសារធាតុសកម្ម និងអាសេតូនីទ្រីល គួរតែត្រូវបានបញ្ចប់ទាន់ពេលវេលា។សារធាតុ Capping និង Oxidation reagents គួរតែត្រូវបានប្រើឱ្យបានឆាប់តាមដែលអាចធ្វើបាន សារធាតុដែលបើកចំហផ្តល់អាយុកាលធ្នើតិច និងសកម្មភាពតិចជាងក្នុងអំឡុងពេលសំយោគ។


ពេលវេលាផ្សាយ៖ សីហា-០៩-២០២២